måndag, augusti 31, 2009
söndag, augusti 30, 2009
Nu är de här!!!
Nu är det dags!
Idag
lördag, augusti 29, 2009
Sverigesamtal och familjelängtan




Gråmulen morgon



fredag, augusti 28, 2009
Ännu en lyckad kväll som gräsänka
onsdag, augusti 26, 2009
Fyra dagar kvar
Svar
tisdag, augusti 25, 2009
Inga sexiga email här inte
"Hej Puss!
Du hoppas du inte är superarg på mig för att jag fuckade up det där med pengarna!!! Fasiken! Jag grämer mig.... Hm... Jaja, som du säger så är det inte mycket att göra åt saken. Jag tar det på mig. Sorry!!!!!!!!!!
Tror jag är lite full i skallen nu. Framförallt av jobbet...
Min kloning vill bara inte funka. Nu har jag screenat ca 300 kolonier och ingen har insert utom den jag hittade när ni åkte, men som visade sig vara felvänd. Tänker som satan på detta. Och då har jag ändå börjat att ENBART fokusera på EN av alla de ligeringar jag ska göra... Suck! Jaja. Nu har jag ett par strategier jag funderar på. Kan du kolla dessa och se ifall jag tänker hyfsat sansat?
1) Den ligering som fungerat (men som är felorienterad) KAN jag ju klyva igen MEN eftersom ena NruI sitet uppenbarligen pajat (fattar inte alls hur det gick till?!?!?!?!) så kan jag inte bara klyva med NruI utan måste klyva med NruI + SacII. Det senare enzymet klyver strax efter NruI (ca 60 bp efter). Jag har kollat och jag måste göra seqential digest eftersom de klyver i helt olika buffert. Den ena i Neb3 och den andra i Neb4. Visst ska man klyva i buffer med lägst salthalt först?! När jag kollar buffertarna har den ena 100mM NaCl och resten är 10-50mM av olika salter i bägge buffertarna. Så då ska jag väl klyva m enzymet som kräver den buffer med 100mM sist???
Ska man precipitera DNAt mellan klyvningarna eller räcker det med att inaktivera enzym 1???? Eller måste jag kanske t o m gelrena eller Pheno-Chloro-rena DNAt innan jag kan klyva m enzym 2???
Tänkte iallafall att jag skulle kunna klyva ut insertet m dessa två enzym och sedan blunta med Klenow så att jag får två blunt ends. Fungerar Klenow på alla enzym?
SacII klyver och ger 5´ CCGC GG 3´
3´ GGC GCC 5´
Sedan tänkte jag iallafall att jag skulle återligera alltsammans. Kanske fungerar det kanske inte, men det kan ev vara värt ett försök?
2) Parallellt med detta funderar jag på att subklona in insertet i en invitrogen vector. Brukar du använda TopoTA cloning vectors? Jag har ju hittat en som heter Zero Blunt PCR cloning Kit (Invitrogen cat# 2700-20) och som vi har i labbet. Man ska ligera in sin PCR produkt i vektorn och sedan kan man klyva ut det med EcoRI. Fast i mitt fall kommer jag inte kunna öppna min vektor med EcoRI efersom detta enzym klyver på fler ställen. Utan jag gissar att jag antingen får kolla upp resten av enzymen som finns i multicloning sequence i Invitrogen-vektorn och se om jag kan använda ngt av dem, annars får jag köra Klenow igen för att blunta antar jag???
Men KAN detta steg ändå göra det enklare?? Och på vilket sätt då jämfört med PCR-ligering direkt? Får jag mer DNA? Eller varför skulle det vara bättre att göra såhär?? Är det för att det är bättre att använda direktklyvt DNA framför att CIPa eller APa det????? För gelrena mitt insert måste jag väl i vilket fall som helst?
3) Funderar även på detta med polylinkers. Hur fungerar det egentligen? Ska jag isåfall designa oligos med NruI site i båda ändar och som sedan innehåller de restr enzym sites som jag skulle vilja använda när jag ska ligera in mitt insert? Jag är säkert hur dum i huvudet som helst men vad ska jag använda för templat????? För hur ska jag amplifiera dessa oligos så att jag kan ligera in dem i min vektor?
Och isåfall måste jag väl sedan göra nya primers för mitt insert också med just rätt sites i både 5´- resp 3´- änden? Som jag så småningom ska kunna ligera ihop med min vektor + polylinkers....?
Jag har funderat lite på Emilys förslag också, men jag tror det är otänkbart för det kommer bli superlånga oligos och det blir alldeles för dyrt!!! Annars hade det såklart varit jättebra!
Ah, jag tror jag blir helt snurrig av alla dessa funderingar hit o dit.... Men det vore super ifall du har tid att titta igenom mina snurriga tankar och se ifall de verkar genomförbara och även om du kan svara på mina frågor. Jag tror att jag ibland blir extra snurrig av att försöka fundera på flera saker samtidigt!!!" *)
Klant!!!
måndag, augusti 24, 2009
Bättre
söndag, augusti 23, 2009
Avsked, vemod och storstädning

lördag, augusti 22, 2009
Dagen
Andra kvällen som gräsänka
Kvällen har varit lyckad! En riktigt rolig, trevlig och social utekväll med vänner. Den enda smolken i bägaren var att vi såklart inte kom in på "hemliga baren". Det var knökfullt hela kvällen. Jag ringde ett par gånger men inget bord fanns att få. Men på det stora hela gjorde det inte så mycket. Nästan inget alls faktiskt. Kvällen blev så himla trevlig och rolig ändå.
Men först ska jag prova att ringa och se ifall M är vaken. Det är ju trots allt morgon där borta nu. Snart 9.30 så kasnke är han uppe.
Här är bilder från kvällen.





fredag, augusti 21, 2009
Ut en sväng
Jag njöt av att äta frukost utan avbrott. Och att kunna gå upp en timme innan man faktiskt var på jobbet. Istället för minst en och en halv som då ändå innebär att man knappt hinner med sig själv alls. Skönt! Fast det ska erkännas att det sög lite i magen nyss när jag läste blogginlägget från M´s moster om besöket. Men mest kändes det himla kul att få sitta på "den andra sidan" och läsa om Lill-Snorpan och hennes bravader.
Och ikväll blir det cocktails!
Jag ska återigen träffa Anna Fair and True, min bloggkompis och hennes Peter. Hon efterfrågade redan innan deras resa hit till NYC den där "hemliga baren" där man kan få goda drinkar. Så det ska det bli. Den där man måste gå in i en telefonhytt på ett korvställe, ringer in till baren för att sedan bli insläppt genom väggen. Hepp!
Det är inte riktigt så märkvärdigt som det låter, men lite roligt ändå. Och de har verkligen goda drinkar där!
Två av mina vänner från gamla jobbet hänger också med. Det ska bli jättekul!
Så jo, nog försöker jag utnyttja den småbarnsfria tiden....!
Och det bästa av allt är att det känns riktigt roligt!
Så nu ska jag snart hem från jobbet och ta en snabb dush och sticka neråt St Marks Place.
torsdag, augusti 20, 2009
Blå
Här är en av sångerna från filmen. Lyssna och njut.
tisdag, augusti 18, 2009
Händelsrik helg













måndag, augusti 17, 2009
The unstoppable force!
Hon GÅR!!!!!!
Och detta fick vi med hem från dagis idag:


